棉铃虫LF60品系中不同抗性基因的分离开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

深入了解abc转运蛋白在昆虫对bt毒素抗性过程中的作用，会加深我们对bt对害虫作用机制和害虫对bt抗性机制的了解。

tanaka（2013年）在sf9细胞中使用体外生物检测法说明了在cryac毒素存在的环境中bmabcc2具有介导细胞肿胀的功能，而且比家蚕钙粘蛋白btr175强10-1000倍 。

此外，使用非洲爪蟾卵母细胞进行的一个双电级电压钳试验表明bmabcc2对cry1ac毒素形成孔洞的能力比btr175强5000倍 (tanaka et al.,2016a)。

2. 研究的基本内容和问题

目标：将abcc2基因上缺失6个碱基的品系从原始品系棉铃虫lf60品系中分离出来。

内容：lf60品系相比于室内敏感品系scd对cry1ac毒素具有1000多倍抗性，之前的研究发现该品系abcc2基因倒数第三个外显子缺失6个碱基，cdna上有73bp的插入 ，导致产生提前终止密码子，蛋白表达不完整。

根据该品系与scd品系杂交f1代存活率，算得抗性显性度为0.6，这与abcc2基因是隐性遗传所相悖。

3. 研究的方法与方案

研究方法：诊断剂量处理法，单对杂交法，dna提取技术，pcr扩增法技术路线：先将抗性品系与敏感品系杂交，得到杂合基因型，利用分子技术得到杂合的突变基因，最后纯化为纯和基因突变。

实验方案：lf60品系雄虫与scd雌虫单对杂交，后代用区分剂量处理，存活的个体作为f1代，选择f1代雄虫与scd雌虫杂交，理论上后代包括四种基因型，在缺失6个碱基的位点设计引物，根据pcr跑出来的条带选择具有突变的个体，由于突变是隐形遗传，将这些个体与scd单对处理，用诊断剂量处理，选择存活率低的单对，后代自交后再通过pcr得到突变纯和的品系。

可行性分析：诊断剂量法经过之前大量实验，可准确区分抗性个体与敏感个体。

4. 研究创新点

通过分离ABCC2基因缺失6个碱基的品系，发现该基因的突变与Cry1Ac的抗性无关，推测Cry1Ac高水平抗性可能是由两个或多个基因控制的，加深了昆虫对Bt抗性机制的了解。

5. 研究计划与进展

LF60品系雄虫与SCD雌虫单对杂交，后代用区分剂量处理，存活的个体作为F1代（2017年9月到10月）选择F1代雄虫与SCD雌虫杂交，理论上后代包括四种基因型，在缺失6个碱基的位点设计引物（2017年11月到12月）。

根据PCR跑出来的条带选择具有突变的个体，由于突变是隐形遗传，将这些个体与SCD单对处理，用诊断剂量处理，选择存活率低的单对（2018年1月），后代自交后再通过PCR得到突变纯和的品系（2018年3月）。