XPC对苏淮哺乳仔猪肠道发育的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.研究意义

哺乳仔猪胃肠道结构和功能发育不全，在面对病原微生物感染和各种应激时，易出现肠道功能紊乱、腹泻等疾病频发的问题，甚至导致死亡，给养猪业造成了严重的经济损失。目前，防治哺乳仔猪腹泻主要采用抗生素，但抗生素长期使用所引起的药物残留及其产生的耐药性问题日益突出。而肠道不仅是营养物质消化和吸收的主要场所，也是动物机体有效阻止外界有害物质对其造成损害的生理屏障。正常的肠道功能是仔猪生长发育和健康的保证，是减少仔猪腹泻等疾病发生的关键。因此，促进哺乳仔猪肠道健康发育十分重要。应用酵母培养物预防腹泻并解决使用抗生素带来的药物残留和耐药性问题，越来越受到国内外的关注。酵母培养物是指在特定的工艺条件控制下由酵母菌在特定的培养基上通过充分的厌氧发酵后形成的代谢产物。作为一种新型微生态制剂，酵母培养物适口性好，营养丰富，安全性高，可有效缓解动物腹泻问题，减缓应激反应及提高免疫能力等，但其在仔猪上的研究较少，对哺乳仔猪肠道发育的影响的研究更是少之又少。本试验以苏淮哺乳仔猪为研究对象，通过组织学方法，比较试验教槽料（treatment 1）和试验教槽料 xpc（treatment 2）的效果，探讨达农威xpc对哺乳仔猪小肠发育的影响，为研发促进哺乳仔猪肠道健康的无抗生物饲料提供新的思路和科学依据。

2.国内外研究概况

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

以苏淮哺乳仔猪为研究对象，通过组织学方法，比较试验教槽料（treatment 1）和试验教槽料 xpc（treatment 2）的效果，探讨达农威xpc对哺乳仔猪小肠发育的影响，为研发促进哺乳仔猪肠道健康的无抗生物饲料提供新的思路和科学依据。

2.研究内容

3. 研究的方法与方案

1.研究方法

以苏淮哺乳仔猪为研究对象，通过组织学方法，比较试验教槽料（Treatment 1）和试验教槽料 XPC（Treatment 2）的效果，测定空肠、回肠的绒毛长度、隐窝深度，探讨达农威XPC对哺乳仔猪小肠发育的影响。

2.技术路线（图见附件）

3.实验方案

3.1 试验材料

3.1.1 试验动物与分组

试验选用12窝出生七天的苏淮哺乳仔猪，随机分为2组，每组3个重复，每个重复2头猪。对照组（T1组）饲喂试验日粮，试验组（T2组）则在试验日粮中添加XPC。

3.1.2 酵母培养物

酵母培养物（XPC）由美国达农威公司提供，其营养组成见表1-1。

3.1.3 日粮成分及营养组成

试验日粮参照美国NRC（1998）仔猪营养需要配制成，日粮配方见表1-2。

3.2 试验方法

3.2.1 试验设计

本研究的试验设计方案见表1-3。

3.2.2 饲养管理

试验过程中，遵循猪场的饲养管理，对试验动物进行正常的驱虫和免疫，定期对圈舍进行消毒。试验猪进行自由采食和饮水。14天开始使用教槽料，30日龄断奶，每窝随机挑选2头仔猪（1公1母）屠宰，取空肠、回肠组织并固定于甲醛溶液中。

3.2.3 测定指标

饲料养分分析参照张丽英的《饲料分析及饲料质量检测技术》第二版。分析苏淮哺乳仔猪饲料配方和成分（干物质、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维）。

3.3 小肠形态观察

3.3.1 组织包埋程序

（1）将组织从75%酒精中取出，80%乙醇60-120min；

（2）95%乙醇I、II依次60-120min；

（3）100%乙醇I、II依次60-120min，无水乙醇III60min；

（4）将脱水后的组织放入乙醇：二甲苯(1：1)溶液30min；

（5）二甲苯I、II、III依次透明20min；

（6）透明后的组织块放入纯石蜡I(45-50℃)，II、III(56-58℃)中各1h；

（7）将石蜡放入盛石蜡的模具中，冷却凝固即可。

3.3.2 组织石蜡切片的制作

将固定的样本经冲洗、脱水、透明、浸蜡、包埋等处理后，用切片机将组织块切为厚度为5μm的切片，在42℃的水浴上展开，然后铺在玻璃板上，37℃烘24h。

3.3.3 常规苏木精伊红（HE）染色

苏木精伊红染色法是石蜡切片技术里最常用的染色方法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着蓝紫色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。染色步骤如下：

（1）二甲苯I、II，各10min；

（2）二甲苯：乙醇(1：1)， 10min；

（3）无水乙醇I、II、III，各5min；

（4）90%乙醇、70%乙醇、自然水冲洗，各5min；

（5）苏木精液染色，1min30s；

（6）自然水冲洗、50%乙醇、70%乙醇，各5min；

（7）伊红溶液染色，2s；

（8）80%乙醇、90%乙醇，各5min；

（9）无水乙醇I、II，各4min；

（10）二甲苯：乙醇(1：1)，4min；

（11）二甲苯I、II，各4min；

（12）中性树脂封固。

3.3.4 测定肠绒毛高度和隐窝深度

取空肠、回肠的常规石蜡切片进行染色。每个样品选取3个不连续的切片，每张切片随机选10根形态完整、自然伸展的肠绒毛，利用显微图像分析系统（Nicon，型号：H550L）对肠绒毛高度、隐窝深度进行测量，并计算绒毛高度与隐窝深度之比值（VH/CD，VCR），各指标取平均数作为测定数据。

绒毛高度（VH）：从绒毛顶段至隐窝开口处的垂直距离。

隐窝深度（CD）：从隐窝开口至隐窝基部的垂直距离。

3.4 数据分析

试验所得数据通过Excel 2013初步统计后，采用SPSS 22.0统计软件进行单因素方差分析（One Ways ANOVA），试验结果以平均值标准误（MeanSEM）表示。

4.可行性分析

本实验内容和试验设计在理论上具有可行性。指导老师所在实验室具备本实验所需的仪器设备。

4. 研究创新点

本试验以苏淮哺乳仔猪为研究对象，通过组织学方法，比较试验教槽料（Treatment 1）和试验教槽料 XPC（Treatment 2）的效果，探讨达农威XPC对哺乳仔猪小肠发育的影响，为研发促进哺乳仔猪肠道健康的无抗生物饲料提供新的思路和科学依据，为酵母培养物在仔猪养殖中的应用提供理论指导。

5. 研究计划与进展

2016.92016.12 查阅文献，确立课题

2017.22017.3 切片、染色、观察

2017.32017.4 数据分析，撰写论文