近期我国华东地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1研究意义猪圆环病毒(porcine circovirus，pcv)属圆环病毒科(circoviridae)圆环病毒属成员，是迄今已知最小的动物病毒之一。

该病毒为无囊膜的单股环状负链dna病毒，病毒粒子直径约17~20nm[1]。

pcv2是由ellis等首次从断奶后多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting sydrome，pmws)病猪体内分离到，已证明是引起pmws的主要病原[2]。

2. 研究的基本内容和问题

2.1研究目标：针对pcv2阳性的组织样品，提取核酸，应用一对或多对pcv2全长序列引物，进行了pcv2全长基因的扩增、克隆和序列测定，并利用分子生物学软件进行了序列分析，研究了近三年中国华东主要区域pcv2的分子流行病学变化趋势。

2.2研究内容：2.2.1从猪场获取并检测得到pcv2阳性的组织病料；2.2.2设计一对或多对 pcv2全长序列的引物；2.2.3对pcv2阳性的样品进行了全长基因的扩增、克隆、序列测定，并利用分子生物学软件进行序列分析。

2.3关键问题：2.3.1扩增pcv2阳性样品的全长基因及序列测定；2.3.2利用分子生物学软件对pcv2全长序列进行分析，总结近年来pcv2的分子流行病学变化趋势。

3. 研究的方法与方案

3.1拟采用的研究方法3.1.1样品采集：从猪场采集发病猪群病料，包括血液和内脏组织（肺、脾、肝、肾以及腹股沟淋巴结），并从中提取dna。

3.1.2引物设计：根据 genbank 发表的pcv2全基因序列设计1对可扩增1 767 bp的引物，同时设计了3对重叠引物来获得1767bp片段。

本研究 pcv2m1/m2 鉴定引物为本实验室设计和保存。

4. 研究创新点

4特色或创新之处4.1本项目的创新之处 4.1.1 pcv2在中国猪群中的感染率很高，且中国 pcv2 分离株与国外分离株相比，变异高。

目前近年华东部分区域pcv2的流行及分型情况尚不十分清楚，亟待进一步研究。

4.1.2本研究有助于了解我国pcv2分子流行病学特征，确定当前中国pcv2主要流行的基因型，为有针对性地研制pcv2的疫苗指明方向。

5. 研究计划与进展

5.1项目研究计划及预期进展2016.092016.10：查阅文献，确定课题方案，准备实验材料；2016.102016.11：圆环全长序列的扩增并获得全长序列；2016.112016.12：测序结果与参考毒株序列用进行同源性分析和遗传进化分析，并生成系统进化树；2017.022017.03：整理实验数据；2017.032017.04：正式撰写论文。